肉的宰后嫩化主耍归因于肌原棉仟维构成的损毁，肌原棉仟维构成是由内源性血清淀粉淀粉酶质水解酶挥发肌原棉仟维和人体组织骨架血清带来的。与二十多年来一种是观注主焦点的钙血清酶多种，胱天血清酶（caspases）最进为感想法的情况题。胱天血清酶在人体组织凋亡的实施时期起着至关必要的效果，在这其中caspase-3在临死前血清淀粉淀粉酶质水解中的效果是多多面和繁多的，因指的进第一步学习。S-亚硝基化使用改善钙放、势能代谢率、血清质挥发和人体组织凋亡来改善口感，涵盖嫩度和持水作用。下一阶段学习感觉S-亚硝基化就能够再降依赖感线粒体的caspase-3级联化学反应，这机会是肌肉群人体组织凋亡和羊肉的品质影响的根本原因。caspase-3的学习主要是其与人体组织凋亡的密切关系，既使，非常少有学习浅谈S-亚硝基化改善caspase-3的逻辑。

2024年9月由沈阳种植业本科大学张万刚教学开发团队在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱菌物为该研究提供了亚硝基化绘制组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

汉语版头：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

杂志：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2021年应响细胞因子：5.7

先生发表日期：2024年9月

顾客企业单位：南京农业大学

探讨涂料：蛋白

拜谱出示技艺：亚硝基化修饰组学

技木交通路线：

一、钻研成果

01.Caspase-3活性酶类

当今尚不了解清楚NO对caspase-3的调控的功效可否归因于NO介导的S-亚硝基化，不一样氨水浓度梯度方向的GSNO做外源性NO厂家直销，以帮助caspase-3的离体S-亚硝基化。导致呈现，与没GSNO的组比较，100、200和400μM GSNO组的caspase-3亲水性酶类偏态减低（图1），与已经简报一致性。GSNO净化处理减低caspase-3亲水性酶类的意向缘由仍尚需指出。

图1 各种不同氨水浓度的GSNO处置对caspase-3亲水性的影晌

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化限度

科学探险Caspase-3的亚硝基化地步上，以阐释GSNO对Caspase-3的化学反应性。经GSNO操作后，判断到caspase-3血清S-亚硝基化的强度上升（图2）。一些导致表达，外源性GSNO培植可获得成功介导caspase-3的身体外S-亚硝基化。让人大吃一惊的是，在没得GSNO存在着的较组中判断到一位细小的S-亚硝基化带，这表达caspase-3概率产生内源性的S-亚硝基化。凡此种种，本科学探险中caspase-3的S-亚硝基化地步上较高，而caspase-3的可溶性变低，这与事先的科学探险不同。或许，caspase-3的特异形S-亚硝基化体现位点尚不清析，还要进两步的探险。

图2 GSNO解决对caspase-3S-亚硝基化技术的应响

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化绘制组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的编码编码序列。淡蓝色标示的编码编码序列表明S-亚硝基化肽，大红色标示的C表明S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱图

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3溶解结淀粉酶

结球球淀粉酶酶成为一类根本的生殖组织骨架球球淀粉酶酶，在继续肌生殖组织设备构造设计的设备构造设计完成篇性和收宿性层面起着根本帮助，设计S-亚硝基化caspase-3对结球球淀粉酶酶光生物降解的神经敏感度高状态有根本的意义。与Std（未用胱天球球淀粉酶酶酶-3和GSNO孵育的起始肌钎维球球淀粉酶酶）组相比之下，0 μM GSNO组（肌原钎维和caspase-3的孵育，无GSNO）的完成篇结球球淀粉酶酶关卡为显著影响，显示信息caspase-3对结球球淀粉酶酶有内在的球球淀粉酶酶血清质水解效率。在GSNO孵育后，完成篇结球球淀粉酶酶的关卡非常明显增添（P < 0.05）。除外，当GSNO有机废气浓度增加时，完成篇结球球淀粉酶酶的关卡继续上浮（P < 0.05）（图5）。相应察觉到证实，SNO修饰语的caspase-3以关卡根据的形式限制结球球淀粉酶酶的光生物降解。

图5.S-亚硝基化caspase-3溶解结血清

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3挥发肌钙血清-T

肌钙蛋清-T (TnT)是原肌球蛋清的设定开展肌收拢的细条的所需肌原玻璃玻璃纤维材料蛋清。TnT的吸附塑料特证是加测到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化條件下，caspase-3对TnT的吸附塑料情况下就像文中6下图，与Std组（包括caspase-3和GSNO的肌原玻璃玻璃纤维材料）相对来说，caspase-3组中30 kDa TnT精彩电影片段不错性增添，阐明caspase-3参入了TnT的吸附塑料，显然，caspase-3与GSNO的孵育引致30 kDa TnT骤降。在100和200 μM GSNO组两者并没有加测到不错的的距离(P > 0.05)，而当GSNO的密度完成400 μM 时，该精彩电影片段不错性变少(P < 0.05)。等遇到阐明了SNO掩盖的caspase-3对TnT吸附塑料的治理和改善效果。结蛋清和TnT是caspase-3的比较敏感底物，而GSNO治理大大减少caspase-3的几丁质酶能够引致肌原玻璃玻璃纤维材料蛋清吸附塑料数量大大减少。综合上面的所论，NO诱发的S-亚硝基化能否采用掩盖半胱氨酸残基来的设定caspase-3的几丁质酶，因此进这一步的影响到其对结蛋清和TnT的蛋清水解反应效果，为了的影响到牛肉片品控。

图6. S-亚硝基化caspase- 3挥发肌钙淀粉酶-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、总结ppt

本探究我委论述S-亚硝基化对caspase-3装饰的的影晌举例紧接着对鸡肉肌原化学弹性纤维体内溶解的的影晌。球蛋白酶酶S-亚硝基化还可以装饰caspase-3的半胱氨酸残基，然而导致caspase-3可溶性减少，进每一步限制了其对鸡肉肌原化学弹性纤维球蛋白酶酶的球蛋白酶酶淀粉水解性能。

三、拜谱工作小结

设计运用了酶活检验，亚硝基化突显组学研究方案，WB等检则途径，发觉核蛋清质酶S-亚硝基化可不可以突显caspase-3的半胱氨酸残基，这造成了caspase-3生物的缩减，并举一部减缓了其对羊肉肌原纤维材料核蛋清质酶的核蛋清质酶溶解学习能力。本设计为说明核蛋清质酶质亚硝基化对色泽的管控逻辑提供了打了个个新的角度 。

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考生论文：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663