400-820-8531
2024年12月，南京医科大学李晶等团队在Journal of Extracellular Vesicles（IF=15.5）上发表了“Distinct molecular properties and functions of small EV subpopulations isolated from human umbilical cord MSCs using tangential flow filtration combined with size exclusion chromatography”的研究论文。该论文提供了一种切向流过滤（TFF）结合尺寸排阻色谱（SEC）的方法来大规模分离和纯化源自人脐带间充质干细胞（HucMSCs）的sEVs亚群。S1-sEVs和S2-sEVs在大小、膜标记蛋白和携带物方面表现出稳定的变化，通过体外实验和动物疾病模型，研究人员验证了S1-sEVs和S2-sEVs的不同功能。S1-sEVs表现出更强的免疫调节作用，而S2-sEVs则在促进细胞增殖和血管生成方面表现出更强的能力。这种方法为针对不同MSCs适应症的靶向治疗干预提供了可能。拜谱动物为该研究提供了淀粉酶组学拜谱生物。
用英文怎么说题头：Distinct molecular properties and functions of small EV subpopulations isolated from human umbilical cord MSCs using tangential flow filtration combined with size exclusion chromatography
发过论文期刊：Journal of Extracellular Vesicles
影晌指数公式：15.5
发表过时间间隔：2024.12.7
小说拜谱生物公司：南京医科大学
组学水平：miRNA测序、蛋清组学（拜谱动物给出）
分析物料：外泌体
的研究自驾路线：
一、科学研究结论
01、在将TFF与SEC系統相综合来分离法sEVs亚群和HucMSCs
要为控制比较适合临床实验app的MSC-sEVs的具规模性性产出，写笔者采用了了种将TFF与SEC相切合的步骤，从HucMSCs的前提养成基中分发型离和纯化sEVs。采用血清质印痕、NTA数据分析、纳流组织术的数据反映出破乳的的两根峰可以代理了sEVs的的两根其他亚群。写笔者将对应着于这的两根峰峰值的sEVs亚群分开 命名规则为S1-sEVs和S2-sEVs（图1）。
图1：TFF融入SEC设备从HucMSCs中离和定性分析sEVs亚群
02、MSC-sEVs亚群的表现
sEVs标志物的差异表达意味着它们可能具有不同的内容或功能。为了表征MSC-sEVs亚群的异质性，首先使用蛋清组学分析。总共在S1和S2-sEVs亚群中分别鉴定出1326和1246个蛋白质，其中447个蛋白质在S1-sEVs中高度表达，127个蛋白质在S2-sEVs中富集（图2a）。KEGG分析表明，蛋白酶体途径是S1-sEVs富集蛋白中最富集的通路，而代谢途径在S2-sEVs中显示出最高水平的富集（图2b）。除此之外，还发现S1-sEVs中生长因子受体的富集，例如表皮生长因子受体（EGFR）、肝细胞生长因子受体（HGFR）、成纤维细胞生长因子受体1（FGFR1）等。然而，在S2-sEVs中，枢纽蛋白与代谢、糖酵解和缺氧诱导因子1（HIF-1）信号通路密切相关（图2c-h）。这说明了S1-sEVs和S2-sEVs在靶细胞活动的调节中可能具有不同的作用。
图2：两根sEVs亚群的核蛋白组学阐述
为了探索sEVs亚群中的其他分子，作者进行了miRNA测序，并在S1-sEVs和S2-sEVs中分别鉴定了173和79个miRNA两个sEVs亚群之间的差异表达miRNA，其中在S1-sEVs中发现了113个独特的miRNA，而在S2-sEVs中仅发现了19个miRNA（图3a-b）。通过qRT-PCR验证了在S1-sEVs或S2-sEVs中富集的代表性miRNA，包括let-7b-5p、miR-155-5p、let-7c-5p、miR-9-5p和miR-30d-5p（图3c-g）。在S1-sEVs中，核心节点靶基因包括酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白zeta（YWHAZ）、BTB结构域和CNC同源物1（BACH1）、丛蛋白D1（PLXND1）、高迁移率组AT-hook1（HMGA1）、SMAD家族成员2（SMAD2）、IL6、IL6R 和转化生长因子β受体1（TGFBR1).在S2-sEVs中，核心节点靶基因被鉴定为PR/SET结构域1（PRDM1）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（CDKN1A）、原纤维蛋白2（FBN2）、Notch受体1（NOTCH1）、KLF转录因子6（KLF6）和贝克蛋白1（BECN1）。GO分析显示S1-sEVs组靶基因中与细胞内蛋白质转运、染色质或组蛋白修饰相关的丰富生物过程，而S2-sEVs组靶基因中富含细胞增殖或代谢相关生物过程的负调控（图3h-j）。KEGG通路分析，发现S1-sEVs的miRNAs靶基因在与RNA转运或贴壁连接等相关的信号通路中更富集，而S2-sEVs中的miRNAs靶基因在丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和Wingless/Integrated（WNT）信号通路中更富集（图3k）。
图3：一个sEVs亚群的miRNA谱
03、S1-sEVs和S2-sEVs对组织核繁殖和巨噬组织核极化的对比分析宏观调控
通过几个sEVs亚群的不一样的随带物组成的，探索进三步分用三个不一样的极量的S1-sEVs或S2-sEVs陪养3T3癌血血组织有时候 用脂多糖（LPS）加工小鼠骨髓源的巨噬癌血血组织（BMDMs）。結果显示S1-sEVs和S2-sEVs对癌血血组织植物的生长和瓦解波特率症状出不一样的的影晌，有时候对巨噬癌血血组织极化的水平都存在对比（图4a-p）。
图4：S1-sEVs和S2-sEVs对細胞增值和巨噬細胞极化的地域差异国家宏观调控
04、S1-sEVs和S2-sEVs前边肢梗死中的文化差异调接
MSC还有衍生产品的sEVs凭借推进新主动脉血栓的确立之后肢血栓痉挛冶疗中被诸多报到，为了能检查S1-sEVs和S2-sEVs对主动脉血栓转为和血栓痉挛进行复苏的损害，凭借单边股主动脉结扎组建了小鼠后肢血栓痉挛3d模型。数据表达与S1-sEVs相信，S2-sEVs表面出优胜的促主动脉血栓转为性能特点，使得血栓痉挛引诱板材损害后后肢快截然修复系统和复苏（图5a-o）。
图5：S1-sEVs和S2-sEVs对后肢坏死的区别开展成效
05、S1-sEVs和S2-sEVs在皮手术伤口痊愈中的角色
MSC名词解释诞生的sEV以自身的在介入手术、心理创伤、烧伤或高血糖问题致使的白色脸部造成 手术患处修复中的的导致而被至关广泛分析分析。以便留意破乳的sEVs亚群对白色脸部造成 手术患处修复的的导致，本分析分析树立半个个含有深部2度烧伤的大鼠模板。可是证实S2-sEVs实现对糖酵解的主动性的导致对白色脸部造成 手术患处修复现象出至关益处的的导致（图6a-p）。
图6：S1-sEVs和S2-sEVs对皮肤好创口俞合的各不相同关系
06、S1-sEVs和S2-sEVs对DSS介导的小肠炎的有所差异的治疗的效果
小说作者显示S1-sEVs和S2-sEVs对巨噬肿瘤细胞旋光性的区别调高以后，再继续在小鼠乙状乙状结肠炎型号中评诂它的免疫检测调高功能表。结局探求了S1-sEVs开展DSS引导的乙状乙状结肠炎的特情人（图7a-s）。
图7：S1-sEVs和S2-sEVs对白色皮肤刀口长好的有差异反应
07、sEVs这两个亚群中怪物进行的一定的差异自我调节
ESCRT依耐性渠道和非ESCRT性渠道都免费指导sEV的怪物突发。在仅仅探索中，我们遇到了sEVs标签物在S1-sEVs和S2-sEVs中的性别差异理解。EGFR是经典英文内吞渠道中已设立的HGS底物，哪怕在S1-sEVs和S2-sEVs过程都就可以观察植物到EGF血清，但在S1-sEVs中EGFR泛素化质量要高得多，HGS在将泛素化物料视情况加以引导到S1-sEVs中起重中之重的作用，采用勾勒HGS敲除肿瘤细胞系遇到HGS的短缺诱导性S1-sEVs的怪物突发确实不错变少，但对S2-sEVs的发生近乎没能影响到，反映S1-sEVs和S2-sEVs采用与众不同的的调节机能分沁，分为又称ESCRT依耐性和ESCRT非依耐性渠道（图8a-t）。
图8：sEVs的这两个亚群期间生物技术有的距离设定
二、篇文章个人心得体会
本研究使用TFF和SEC从人MSC中分离的两个sEV亚群在大小、膜标志物或携带物上表现出差异，并探究不同的sEVs亚群代表了MSCs的不同生物学功能。利用血清组学，miRNA测序及基因敲除，模型构建等分子生物学实验表明了高度表达CD9、HRS和GPC1的S1-sEVs表现出更大的免疫调节作用，而富含CD63和FLOT1/2表达的S2-sEVs在促进细胞增殖和血管生成方面具有增强的能力。这些差异归因于它们包含的特定蛋白质和miRNA。进一步研究显示，两个不同的sEVs亚群对应于不同的生物过程：ESCRT通路（S1-sEVs）和以脂质筏（S2-sEVs）为代表的ESCRT非依赖性通路（图9）。这种方法可能为各种MSC适应症的靶向治疗干预提供优势。
图9：sEVs亚群的生物技术镶嵌依赖关系于有所差异的癌细胞内方法
三、拜谱个人总结
该研究使用TFF-SEC系统从人脐带间充质干细胞中规模化生产不同的sEVs亚群，并且鉴定和表征了两种不同的sEVs亚群，S1-sEVs和S2-sEVs，它们在生物发生、特征和携带物含量方面有所不同。这些差异导致了它们生物学功能的变化。虽然MSC衍生的SEV因其临床潜力而备受关注，但该研究引入了一个新概念，即利用这些不同的MSC sEVs亚群对特定疾病进行靶向治疗。拜谱生物为该研究提供了蛋清组学检测分析服务，拜谱生物可提供完善成熟的转录组学、蛋白组学、代谢组学以及多组学联合产品技术服务体系，助力发表高分文献，欢迎致电咨询！
参阅学术论文：
LiuW, Wang X, Chen Y, Yuan J, Zhang H, Jin X, Jiang Y, Cao J, Wang Z, Yang S, Wang B, Wu T, Li J. Distinct molecular properties and functions of small EV subpopulations isolated from human umbilical cord MSCs using tangential flow filtration combined with size exclusion chromatography. J Extracell Vesicles. 2025 Jan;14(1):e70029. doi: 10.1002/jev2.70029. PMID: 39783889; PMCID: PMC11714183
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